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小鬼的MeRIPseqPipe分析拆解03-数据质控
2024-01-21 17:41  浏览:2731  搜索引擎搜索“手机展会网”
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我们可以看到MeRIPseqPipe流程中主要是用的fastp与fastqc两个软件对原始数据进行了预处理。

fastqc可以对fq数据进行质量评估,使用java语言编写;fastp软件可以进行数据过滤同时进行质量评估,主要是用C++语言编写,支持多线程,处理数据速度非常快。

MeRIPseqPipe流程github上作者的这块相关的代码抠出来如下:




image-20220320231622072

Fastp:




image-20220320231827489

Fastqc:




image-20220320231852628

抠出来简化!

一、fastp处理数据

fastp这个软件既可以对数据进行质量评估,同时还可以对原始数据进行简单的过滤。官网:

  • -i:原始fq数据
  • -o:过滤后的fq数据
  • -j:json格式的质控报告
  • -h:html网页版格式报告
  • -w:线程数

## 激活安装了软件的小环境conda activate rna ## human# 接上个程 cd Human_GSE52600 mkdir Cleandata ls *gz |while read id do name=${id%.fastq.gz} echo "fastp -i $id -o Cleandata/${name}_cleandata.fq.gz -j Cleandata/${name}_fastp.json -h Cleandata/${name}_fastp.html -w 12 " done >fastp.sh # run nohup sh fastp.sh >fastp.sh.log & # 同样运行小鼠的Mouse cd Mouse_GSE52662/ mkdir Cleandata #代码同上

放一张fastp.sh的内容:




image-20220320230014737

简单的看下fastp的生成内容:

生成文件:




image-20220320232654836

挑一个html看一下:

主要分为四个部分:

  • Summary:这里一般就是一些数据的基本统计情况,比如这里测序单端50bp,过滤前约20M reads,1G 碱基数,GC含量52%左右;过滤后的数据情况,以及过滤了多少数据。我们这里并没有加明显的过滤参数,流程有个-q默认值15用来过滤低碱基质量值等还有其他默认过滤参数。



image-20220320232904020

  • Duplication:看数据read的重复情况,一般来说转录组的数据是有比一定的比例的read重复的:一个基因表达多个转录本等原因。



image-20220320233340571

横坐标为reads重复的次数,纵坐标为比例。你可以看见大多数的read重复的次数在1-5次。

我们可以简单统计一下某个数据中reads出现的次数:

zless -S SRR1035213_cleandata.fq.gz |paste - - - - |cut -f 2 |sort |uniq -c |sort -nk 1 -r >stat.txt

  • Before filtering:过滤前的Q值,GC含量等,其中有一个kmer,组合了5个碱基的所有组合情况,看5个碱基的序列在数据中出现的情况,可以用来查看数据中是否存在比较特殊高频率的短片段。



image-20220320233838504

  • After filtering:同过率前。

二、fastqc质量评估

fastqc软件主页:https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/,有时间的可以选择去闲逛一下!

  • --noextract:输出结果不压缩
  • -o:输出文件夹

# 创建文件夹 cd Human_GSE52600 mkdir FastQC ls *gz |while read id do echo "fastqc -o FastQC --noextract $id " done >fastqc.sh nohup sh fastqc.sh >fastqc.sh.log & # Mouse同上

输出结果如下:




image-20220320234155247

fq结果就不加以解释了~~~,可参考以前的教程。

发布人:9bc3****    IP:124.223.189***     举报/删稿
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